【48812】中华人民共和国轻工行业规范——皱纹纸(节选)之二

　　于同一批号的三个大包装中至少随机抽取15包小包装样品，三分之一用于测验，三分之一留样，三分之一必要时复测用。样品最小包装不该有决裂，查验前不得启开。在100级净化条件下或超净工作台顶用无菌办法至少翻开5个小包装，从中随机精确称取10 g样品，剪碎后参加到100 mL灭菌生理盐水中，振打80次或用混匀器充沛混匀。每一种样品共取30 g，别离接种3管生理盐水样液。待上述样液天然沉降后取上清液作菌落计数。共接种6个平皿，每个平皿中参加1 mL样液，然后用冷却至45℃左右的熔化的养分琼脂15 mL倒入平皿内，混合均匀。待琼脂凝结后翻转平皿置37℃ 培育24 h后，核算平板上的菌落数。当平板上菌落数超越300时应稀释后再计数。菌落呈片状成长的平板不宜选用；计数契合规范要求的平板上的菌落，按式(A1)核算成果：所得成果超越规范值的10％，有必要重复检测一次，以两次成果的平均数为终究成果。取样液的上清液接种乳糖胆盐发酵管。共接种3管，每管接种1 mL样液，置37℃ 培育24 h，如不产酸也不产气，则陈述为大肠菌群阴性。如产酸产气，则划线接种伊红美蓝琼脂平板，置37℃ 培育18～24 h，调查平板上菌落形状。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，圆形，边际规整，外表非常润滑湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深的菌落。挑取可疑大肠菌落1～2个进行革兰氏染色镜检，一起接种乳糖发酵管于37℃培育24 h，调查产气状况。凡乳糖胆盐发酵管产酸产气，乳糖发酵管产气，在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，可陈述被检样品检出大肠菌群。取样液5 mL，参加到50 mL SCDLP培育液中，充沛混匀，置37℃培育24 h。自上述增菌液中取1～2接种环，划线接种在血琼脂培育基上，置37℃培育24～48 h。在血琼脂平板上该菌菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不通明，外表非常润滑，周围有溶血圈。挑取典型菌落，涂片作革兰氏染色镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，摆放成葡萄状，无芽胞与荚膜。镜检契合上面叙述的状况，应进行下列实验：甘露醇发酵实验：取上述菌落接种到甘露醇培育液中，置37℃培育24 h，发酵甘露醇产酸者为阳性。玻片法：取清洁枯燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔血浆，挑取菌落别离与生理盐水和血浆混合，5 min如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝结则为阳性，如两者均无凝结则为阴性。凡盐水滴与血浆滴均有凝结现象，再进行试管凝结酶实验。试管法：汲取1∶4新鲜血浆0.5 mL，放灭菌小试管中，参加等量待检菌24 h肉汤培育物0.5 mL。混匀，放37℃温箱或水浴中，每半小时调查一次，24 h之内出现凝块即为阳性。一起以已知血浆凝结酶阳性和阴性菌株肉汤培育物各0.5 mL作阳性与阴性对照。A5.2 成果陈述：凡在琼脂平板上有可疑菌落成长，镜检为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝结酶实验阳性者，可陈述被检样品检出金黄色葡萄球菌。取样液5 mL参加到50 mL匹克氏肉汤（A1.9）中，37℃培育24 h。将培育物划线 h调查菌落特征。溶血性链球菌在血平板上为灰白色，半通明或不通明，针尖状突起，外表非常润滑，边际规整，周围有无色通明溶血圈。挑取典型菌落作涂片革兰氏染色镜检，应为革兰氏阳性，呈链球状摆放的球菌。镜检契合上面叙述的状况，应进行下列实验：链激酶实验：汲取草酸钾血浆0.2 mL(0.01 g草酸钾加5 mL兔血浆混匀，经离心沉积，汲取上清液)，参加0.8 mL灭菌生理盐水，混匀后再参加待检菌24 h肉汤培育物0.5 mL和0.25％氯化钙0.25 mL，混匀，放37℃水浴中，2 min调查一次(一般10 min内可凝结)，待血浆凝结后持续调查并记载溶化时刻。如2 h内不溶化，持续放置24 h后调查，如凝块悉数溶化为阳性，24 h仍不溶化为阴性。杆菌肽灵敏实验：将被检菌菌液涂于血平板上，用灭菌镊子取每片含0.04单位杆菌肽的纸片放在平板外表上，一起以已知阳性菌株作对照，在37℃下放置18～24 h，有抑菌带者为阳性。A6.2 成果陈述：镜检革兰氏阳性链状摆放球菌，血平板上出现溶血圈，链激酶和杆菌肽实验阳性，可陈述被检样品检出溶血性链球菌。